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第一章 生物大分子的分离纯化1

第一节　概述1

上篇 生物化学实验原理1

第二节　生物原料的选择和预处理3

第三节　生物组织与细胞的破碎5

第四节　生物大分子的提取5

第五节　生物大分子的分离纯化8

第六节　生物大分子活性物质的浓缩10

第七节　生物大分子的结晶12

第八节　生物大分子活性物质的干燥13

第一节　蛋白质含量的测定16

第二章 生物大分子活性物质含量和纯度的分析方法16

第二节　粘多糖的定量及生物活性测定17

第三节　核酸含量的测定19

第四节　生物大分子纯度的鉴定20

第三章　层析技术23

第一节　层析技术分类23

第二节　液相层析法的基本原理25

第三节　柱层析系统基本操作方法33

第四章　吸附层析法39

第一节　基本原理39

第二节　影响吸附的因素40

第三节　吸附柱层析法41

第五章　纸层析法45

第一节　纸层析基本原理45

第二节 影响Rf的主要因素45

第三节　纸层析实验技术47

第六章　薄层层析法53

第一节　薄层层析原理53

第二节　薄层层析的特点55

第三节　吸附剂的性质与选择56

第四节　薄层层析实验技术56

第五节　薄层层析的定性分析62

第六节　薄层层析的定量分析63

第七节　薄层层析法的近代发展64

第七章　离子交换层析法66

第一节　基本原理66

第二节　离子交换层析介质67

第三节　离子交换树脂68

第四节　离子交换纤维素74

第五节　葡聚糖凝胶离子交换剂及琼脂糖凝胶离子交换剂77

第六节　离子交换层析实验技术80

第七节　离子交换层析法的应用84

第八章　凝胶层析法85

第一节　引言85

第二节　基本原理85

第三节　凝胶的条件和类型88

第四节　凝胶层析实验技术92

第五节　影响凝胶层析的主要因素94

第九章　亲和层析法96

第一节　基本原理96

第二节　配基和载体的选择96

第三节　亲和吸附剂的制备方法98

第四节　亲和层析实验技术102

第五节　亲和层析应用举例104

第六节　金属螯合亲和层析106

第十章　疏水层析法111

第一节　疏水层析原理111

第二节　疏水层析的分离机理112

第三节　影响疏水层析分离的因素113

第十一章　电泳技术115

第一节　电泳基本原理115

第二节　电泳的分类119

第三节　醋酸纤维素薄膜电泳120

第四节　琼脂糖凝胶电泳121

第五节　聚丙烯酰胺凝胶电泳127

第六节　染色方法148

第七节 聚丙烯酰胺凝胶电泳过程中异常现象产生的原因及解决办法155

第八节　毛细管电泳157

第一节　离心的基本理论165

第十二章　离心技术165

第二节　离心的基本方法167

第三节　离心机的安全操作与保养170

第十三章　膜分离技术172

第一节　过滤技术172

第二节　半透膜分离技术173

第三节　超滤技术175

第十四章 紫外－可见吸收光谱分析178

第一节　光谱分析的基本概念178

第二节　化合物中的发色基团及助色基团181

第三节　紫外－可见分光光度计183

第四节　紫外－可见吸收光谱分析方法188

第五节 紫外－可见吸收光谱分析的影响因素192

下篇　生物化学实验194

实验1　香菇多糖的制备194

实验2　魔芋多糖的提取、魔芋葡甘聚糖含量的测定及还原糖成分分析197

实验3 甲壳素和壳聚糖的制备及壳聚糖乙酰度的测定202

实验4　脂肪碘值的测定206

实验5　血清总胆固醇含量的测定（磷硫铁法）209

实验6　卵磷脂的制备212

实验7　维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）215

实验8　氨基酸定量测定——茚三酮显色法219

实验9　氨基酸的分离与鉴定——滤纸层析法222

实验10　蛋白质定量测定（1）——微量凯氏定氮法227

实验11　蛋白质定量测定（2）——双缩脲法232

实验12　蛋白质定量测定（3）——Folin-酚法（Lowry法）236

实验13　蛋白质定量测定（4）——考马斯亮蓝染色法240

实验14　蛋白质定量测定（5）——BCA法243

实验15 蛋白质定量测定（6）——紫外（UV）吸收法246

实验16　蛋白质相对分子质量测定（1）——凝胶过滤层析法250

实验17　蛋白质相对分子质量测定（2）——SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法262

实验18　聚丙烯酰胺等电聚焦电泳测定蛋白质等电点271

实验19　蛋白质及多肽N-末端氨基酸残基测定——DNS-Cl法278

实验20　蛋白质印迹法286

实验21　血红蛋白脱辅基和重组293

实验22　细胞色素c的制备和测定297

实验23　凝胶层析法分离纯化含锌金属硫蛋白310

实验24 固定化金属离子亲和层析313

实验25　疏水层析分离金属结合蛋白316

实验26　脂蛋白的分离——琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶电泳法319

实验27　聚丙烯酰胺凝胶电泳分离乳酸脱氢酶同工酶（活性染色鉴定法）323

实验28　谷胱甘肽转硫酶的制备及动力学研究332

实验29 溶菌酶的制备及活性测定340

实验30　超氧化物歧化酶的分离纯化345

实验31　超氧化物歧化酶活性染色鉴定法351

实验32　酯酶的分离、纯化与活性测定354

实验33 亲和层析及离子交换层析法分离纯化乳酸脱氢酶及其同工酶359

实验34　核酸定量测定（1）——定磷法368

实验35　核酸定量测定（2）——紫外（UV）吸收法373

实验36　猪脾脏DNA制备与二苯胺测定法376

实验37 酵母RNA提取与地衣酚测定法380

实验38　质粒DNA的微量制备（碱裂解法、煮沸裂解法）384

实验39 质粒DNA限制性内切酶酶切及琼脂糖凝胶电泳390

实验40　大肠杆菌感受态细胞的制备及转化397

实验41 聚合酶链式反应（PCR）402

实验42　核酸原位杂交407

实验43　免疫球蛋白的分离纯化413

实验44　免疫学检测法420

实验45　酶联免疫吸附测定法434

附录444

附录Ⅰ 实验室安全及防护知识444

一、实验室安全知识444

二、实验室灭火法445

三、实验室急救446

附录Ⅱ 试剂及试剂配制与保存447

一、一般化学试剂的分级447

二、试剂配制的一般注意事项447

三、易变质及需要特殊方法保存的试剂448

四、标准溶液的配制和标定448

五、缓冲溶液449

六、指示剂457

七、干燥剂458

附录Ⅲ　一些常用单位459

一、长度单位459

二、体积单位459

三、质量单位459

四、物质的量与物质的量浓度单位460

附录Ⅳ 单位与浓度的表示及溶液浓度的调整460

一、单位表示460

二、溶液浓度的表示及其配制461

三、溶液浓度的调整462

一、实验误差463

附录Ⅴ 实验误差与提高实验准确度的方法463

二、误差来源465

三、提高实验准确度的方法466

四、准确度、精确度和误差的关系467

附录Ⅵ 实验记录与实验报告467

一、实验记录467

二、实验报告468

三、表格和图解469

附录Ⅶ 常用数据表470

一、元素的相对原子质量表470

二、常用市售酸碱的浓度472

三、一些常用化合物的溶解度（20℃）472

四、一些常用做缓冲剂的化合物的酸解离常数473

六、氨基酸的一些物理常数474

五、某些有机溶剂的主要物理常数474

七、常见氨基酸在不同溶剂系统中的Rf476

八、嘌呤、嘧啶碱基、核苷和核苷酸的相对分子质量477

九、某些蛋白质的物理性质477

十、一些常见蛋白质相对分子质量参考值478

十一、常用蛋白质相对分子质量标准参照物479

十二、常见蛋白质等电点参考值479

十三、硫酸铵饱和度的常用表481

十四、离心机转数（r/min）与相对离心力（RCF）的换算482

十五、常用化学物质相对分子质量表483

一、常用离子交换纤维素485

附录Ⅷ 层析法常用数据表及层析介质性质485

二、常用国产离子交换树脂的某些物理化学性质表486

三、各类常用离子交换树脂型号对照表488

四、离子交换层析介质的技术数据489

五、凝胶过滤层析介质的技术数据490

六、聚丙烯酰胺凝胶的技术数据492

七、琼脂糖凝胶的技术数据492

八、疏水层析介质的技术数据493

九、部分亲和层析介质的技术数据494

十、各种凝胶所允许的最大操作压495

附录Ⅸ 常用限制性内切酶酶切位点496