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绪论1

一、学习目标1

二、生物化学实验技术发展简史1

三、实验室规则3

四、实验记录与实验报告3

第一章 量器的使用、校正与实验数据的处理5

一、常用量器的使用规则5

二、常用量器容量的校正6

三、实验误差与数据处理7

实验一 吸量管和微量可调式移液器的使用、校正与数据处理10

第二章 分光光度技术11

一、光吸收的基本知识11

二、光吸收的基本定律12

三、吸光度的测量13

四、定量分析方法16

实验二 分光光度法测定未知溶液的浓度16

第三章 层析技术18

一、层析技术的基本概念和特点18

二、层析法的分类19

三、常用的层析方法19

四、柱层析的基本装置和基本操作25

实验三 Sephadex G-25凝胶层析27

第四章 电泳技术29

一、电泳的基本原理29

二、电泳的分类31

三、常用的电泳技术32

四、染色方法37

实验四 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳38

实验五 血清蛋白质聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳41

实验六 DNA的琼脂糖凝胶电泳44

第五章 离心技术46

一、离心技术的基本理论46

二、离心机的分类48

三、常用的离心分离方法49

四、离心操作注意事项51

第六章 酶活力的测定与酶法分析52

一、酶活力的测定52

二、酶法分析55

实验七 血清中碱性磷酸酶活力的测定（磷酸苯二钠法）57

实验八 血清中葡萄糖浓度的测定（GOD-POD法）59

实验九 琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制61

第七章 临床常用生物化学检验64

一、血清蛋白质含量的测定64

实验十 血清总蛋白的测定（双缩脲法）64

实验十一 血清白蛋白的测定（溴甲酚绿法）66

二、血清葡萄糖含量的测定68

实验十二 血清葡萄糖的测定（邻甲苯胺法）68

实验十三 口服葡萄糖耐量试验（OGTT）70

三、血清脂类物质的测定71

实验十四 血清甘油三酯的测定（GPO-PAP法）72

实验十五 血清总胆固醇的测定（胆固醇氧化酶法）74

实验十六 血清高密度脂蛋白-胆固醇（HDL-Ch）的测定（磷钨酸-Mg2＋沉淀法）75

四、肝功能的相关检测77

实验十七 血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活力的测定（改良赖氏法）77

实验十八 血清总胆红素和直接胆红素的测定（改良J-G法）79

五、肾功能的相关检测82

实验十九 血清尿素的测定（脲酶比色法）82

实验二十 血清尿酸的测定（酶偶联法）84

第八章 基因工程技术87

一、获取目的基因88

二、选择适当的载体88

三、限制性内切酶切割DNA89

四、DNA片段的回收90

五、目的基因与载体片段的连接90

六、重组DNA导入宿主细胞91

七、重组DNA的筛选与鉴定91

八、外源基因的表达与目的蛋白的纯化92

实验二十一 质粒DNA的小量快速提取（碱裂解法）92

实验二十二 人外周血白细胞DNA的制备（NaI法）94

第九章 血清白蛋白的纯化与鉴定96

实验二十三 盐析与葡聚糖凝胶G-25凝胶层析脱盐97

实验二十四 DEAE-纤维素离子交换层析99

实验二十五 考马斯亮蓝G250染色法测定蛋白质的浓度101

实验二十六 蛋白质垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）102

实验二十七 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）105

第十章 重组DNA的构建及其在大肠杆菌中的诱导表达107

实验二十八 目的基因的PCR扩增108

实验二十九 目的基因与载体的限制性双酶切111

实验三十 从琼脂糖凝胶中回收DNA（玻璃粉末洗脱法）112

实验三十一 目的基因片段与载体的连接114

实验三十二 大肠杆菌感受态细胞的制备、转化与筛选115

实验三十三 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达和SDS-PAGE检测117

实验三十四 Western印迹法检测表达蛋白118

附录 常用生物化学仪器的使用方法121

附录A 721E型分光光度计121

附录B HD-3型紫外检测仪122

附录C BSZ-100型自动部分收集器124

附录D LM17型记录仪125

附录E DYY-6C型电泳仪126

附录F Adventurer系列电子天平126

附录G H-1650型离心机127

附录H PTC-150型PCR仪128

参考文献130