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1绪论1

1.1 水曲柳概述1

1.1.1 水曲柳生物学特性和应用价值1

1.1.2 水曲柳繁殖研究现状1

1.2 白蜡树属植物组织培养的研究进展2

1.2.1 白蜡树属种类及其分布2

1.2.2 白蜡树属组织培养的研究现状3

1.3 植物体细胞胚胎发生的研究进展5

1.3.1 体细胞胚胎发生及其特点5

1.3.2 体细胞胚胎发生的意义5

1.3.3 植物体细胞胚胎发生的关键环节6

1.3.4 植物体细胞胚胎发生的影响因素7

1.3.5 植物体细胞胚胎发生的组织细胞学研究9

1.3.6 植物体细胞胚胎发生中活性氧的研究13

1.3.7 植物体细胞胚胎发生中NO的研究15

1.4 水曲柳体细胞胚胎发生的研究进展18

1.4.1 水曲柳体细胞胚胎发生的研究意义18

1.4.2 水曲柳体细胞胚胎发生的研究现状18

1.4.3 研究中存在的问题19

参考文献20

2水曲柳成熟合子胚体细胞胚胎发生研究28

2.1 材料与方法28

2.1.1 试验材料28

2.1.2 试验方法28

2.1.3 数据处理与分析30

2.2 结果与分析30

2.2.1 水曲柳成熟合子胚的体细胞胚诱导研究30

2.2.2 水曲柳成熟合子胚的体细胞胚成熟34

2.3 讨论35

2.4 本章结论36

参考文献37

3外源H2O2和NO对水曲柳体细胞胚诱导的影响39

3.1 材料与方法39

3.1.1 试验材料39

3.1.2 试验方法39

3.2 结果与分析41

3.2.1 H2O2对水曲柳体细胞胚胎发生的影响41

3.2.2 CAT对水曲柳体细胞胚胎发生的影响42

3.2.3 SNP对水曲柳体细胞胚胎发生的影响45

3.2.4 PTIO对水曲柳体细胞胚胎发生的影响48

3.3 讨论50

3.3.1 H2O2在水曲柳体细胞胚胎发生中的作用50

3.3.2 NO在水曲柳体细胞胚胎发生中的作用51

3.4 本章结论52

参考文献52

4水曲柳体细胞胚的增殖和植株再生培养54

4.1 材料与方法54

4.1.1 试验材料54

4.1.2 试验方法54

4.1.3 数据处理与分析55

4.2 结果与分析56

4.2.1 水曲柳体细胞胚的增殖56

4.2.2 次生体细胞胚的形态学观察56

4.2.3 水曲柳次生体细胞胚的萌发57

4.2.4 体细胞胚苗的移栽和驯化59

4.3 讨论59

4.4 本章结论59

参考文献60

5水曲柳体细胞胚增殖材料的筛选和继代次数分析61

5.1 材料与方法61

5.1.1 试验材料61

5.1.2 试验方法61

5.1.3 数据观察与统计分析62

5.2 结果与分析63

5.2.1 水曲柳体细胞胚增殖培养的材料筛选63

5.2.2 水曲柳体细胞胚增殖培养的继代次数分析67

5.3 讨论67

5.4 本章结论69

参考文献70

6水曲柳体细胞胚萌发材料的筛选和植株再生能力分析71

6.1 材料与方法71

6.1.1 试验材料71

6.1.2 试验方法71

6.1.3 数据观察与统计分析73

6.2 结果与分析73

6.2.1 水曲柳体细胞胚萌发培养的材料筛选73

6.2.2 水曲柳体细胞胚萌发培养的继代次数分析75

6.2.3 水曲柳体细胞胚生根培养的继代次数分析76

6.2.4 植株的移栽成苗78

6.3 讨论78

6.4 本章结论79

参考文献79

7水曲柳体细胞胚胎发生中的形态学和细胞生物学观察81

7.1 材料与方法81

7.1.1 试验材料81

7.1.2 试验方法81

7.2 结果与分析83

7.2.1 水曲柳体细胞胚胎发生的形态学观察和组织学分析83

7.2.2 TUNEL细胞凋亡原位检测结果85

7.2.3 DAPI染色结果分析86

7.3 讨论87

7.4 本章结论88

参考文献89

8水曲柳体细胞胚胎发生中的生物化学研究91

8.1 材料与方法91

8.1.1 试验材料91

8.1.2 试验方法91

8.1.3 数据处理与分析92

8.2 结果与分析92

8.2.1 活性氧代谢研究92

8.2.2 超氧阴离子含量测定93

8.2.3 细胞总死亡量测定95

8.3 讨论96

8.4 本章结论97

参考文献98

9外源H2O2和NO对水曲柳体细胞胚胎发生中PCD的影响99

9.1 材料与方法99

9.1.1 试验材料99

9.1.2 试验方法99

9.1.3 数据统计与分析100

9.2 结果与分析100

9.2.1 外源H2O2对水曲柳外植体细胞PCD的影响100

9.2.2 外源NO对水曲柳外植体细胞PCD的影响102

9.2.3 DAPI染色观察细胞核的形态变化结果103

9.3 讨论104

9.3.1 水曲柳体细胞胚胎发生中的PCD现象104

9.3.2 外源H2O2对水曲柳外植体细胞PCD的影响104

9.3.3 外源NO对水曲柳外植体细胞PCD的影响105

9.4 本章结论106

参考文献106

10外源H2O2对外植体细胞死亡和体细胞胚胎发生的影响107

10.1 材料与方法107

10.1.1 试验材料107

10.1.2 试验方法107

10.1.3 数据统计与分析108

10.2 结果与分析108

10.2.1 细胞总死亡量分析108

10.2.2 细胞内H2O2含量分析108

10.2.3 细胞内NO含量分析109

10.2.4 相关性分析110

10.3 讨论111

10.4 本章结论112

参考文献113

11外源H2O2对外植体细胞H2O2代谢和NO合成的影响114

11.1 材料与方法114

11.1.1 试验材料114

11.1.2 试验方法114

11.1.3 数据统计与分析116

11.2 结果与分析116

11.2.1 细胞内NO和H2O2含量变化116

11.2.2 ROS相关酶活性变化117

11.2.3 NO相关酶活性变化119

11.2.4 相关性分析120

11.3 讨论121

11.3.1 外源H2O2对内源H2O2代谢的影响121

11.3.2 外源H2O2对内源NO合成和代谢的影响123

11.4 本章结论123

参考文献123

12外源NO对外植体细胞死亡和体细胞胚胎发生的影响125

12.1 材料与方法125

12.1.1 试验材料125

12.1.2 试验方法125

12.1.3 数据统计与分析125

12.2 结果与分析126

12.2.1 细胞总死亡量分析126

12.2.2 细胞内H2O2含量分析126

12.2.3 细胞内NO含量分析127

12.3 讨论128

12.4 本章结论130

参考文献130

13外源NO对外植体细胞H2O2代谢和NO合成的影响132

13.1 材料与方法132

13.1.1 试验材料132

13.1.2 试验方法132

13.1.3 数据统计与分析132

13.2 结果与分析132

13.2.1 细胞内NO和H2O2含量变化132

13.2.2 ROS相关酶活性变化134

13.2.3 NO相关酶活性变化135

13.2.4 相关性分析136

13.3 讨论137

13.3.1 外源NO对内源H2O2合成和代谢的影响137

13.3.2 外源NO对内源NO合成和代谢的影响137

13.4 本章结论138

参考文献138

14水曲柳体细胞胚胎发生中细胞内NO合成途径分析140

14.1 材料与方法140

14.1.1 试验材料140

14.1.2 试验方法140

14.1.3 数据统计与分析141

14.2 结果与分析141

14.2.1 NO抑制剂对体细胞胚胎发生的影响141

14.2.2 细胞内H2O2含量变化142

14.2.3 细胞内NO含量变化143

14.2.4 细胞总死亡量分析144

14.2.5 细胞PCD比例的变化145

14.3 讨论146

14.4 本章结论148

参考文献148

15结论与研究展望150

15.1 主要结论150

15.2 水曲柳体细胞胚胎发生的研究展望153

编后记155