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第一节 超氧阴离子1

第一章 活性氧的制备1

第二节 羟自由基2

第三节 单线态氧3

第四节 脂自由基5

第五节 ONOO？5

第二章 活性氧的测定方法7

第一节 电子自旋共振法的应用7

一、ESR标本处理方法7

1.冷冻法7

2.冰冻干燥法7

3.冷冻成形法7

二、自旋捕捉技术及样品制备8

4.直接测定法8

第二节 羟自由基的测定9

一、高效液相色谱法9

二、化学发光法11

1.邻菲罗啉化学发光法11

2.酵母化学发光法12

三、荧光分析法13

四、分光光度法14

1.邻二氮菲+Fe2+氧化法14

2.细胞色素C氧化法15

3.水杨酸比色法16

五、气相色谱法17

1.碘化钾比色法18

一、分光光度法18

第三节 过氧化氢的测定18

2.四氯化钛法19

3.Fe3+-邻二氮菲分光光度法20

4.非酶法21

5.其他分光光度法22

二、辣根过氧化物酶法22

1.HRP-酚红法22

2.HRP-荧光法23

3.HRP-DCF荧光法24

4.过氧化物酶-氧化酶法26

三、NADPH氧化法27

1.GSH-NADPH氧化法27

2.Scopoletin-NADPH氧化法29

2.鲁米诺化学发光法30

四、化学发光法30

1.TCPO-ANS化学发光法30

3.TCPO-TEA化学发光法31

五、DMTU消耗法32

六、组织化学法32

第四节 超氧阴离子的测定32

一、NBT还原法32

二、高铁细胞色素C还原法34

三、荧光法35

第五节 单线态氧的检测35

一、发光检测法36

1.直接检测发光法36

2.OH？-NaOCl-H2O2-红细胞影泡体系36

第一节 细胞活力检测37

3.海萤荧光素发光体系37

二、ESR法38

三、荧光分光光度法39

四、高效液相色谱法40

一、流式细胞术41

第六节 呼吸爆发的测定41

二、共聚焦显微镜法42

第三章 氧化型低密度脂蛋白47

第一节 低密度脂蛋白的提纯47

一、低密度脂蛋白的提取47

1.超速离心法47

2.区带离心法48

3.沉淀法50

二、纯度鉴定51

第二节 低密度脂蛋白的氧化51

一、LDL的氧化修饰51

1.铜诱导法51

2.铁诱导法52

3.巨噬细胞修饰52

5.丙二醛修饰法53

4.自由基释放剂法53

二、LDL氧化修饰度鉴定54

第三节 氧化型低密度脂蛋白定量55

一、Ox-LDL的检测56

二、自身抗体的测定57

第四章 脂质过氧化60

第一节 脂质过氧化底物的检测60

一、氧气的利用60

二、多不饱和脂肪酸60

第三节 TBA反应物质的检测61

一、ESR及自旋捕集法61

二、化学发光法61

第二节 脂自由基的检测61

一、TBA比色法62

二、TBA荧光法64

三、组织中过氧化脂质的测定65

四、血清LPO测定66

第四节 醛类终产物的检测67

一、DNPH法67

二、HPLC法68

三、GC-MS法69

四、CHD法70

第五节 脂氢过氧化物的检测71

一、碘量法71

二、谷胱甘肽过氧化物酶法73

三、FOX法74

四、氧化还原比色法77

五、亚甲基蓝法78

六、环加氧酶法79

七、二氧荧光素法81

第六节 荧光产物的检测81

一、组织匀浆与亚细胞成分中的荧光物质测定81

二、血清水溶性脂质过氧化物测定83

一、乙烷的测定84

第七节 烃类气体的测定84

二、戊烷的测定86

第八节 共轭二烯的检测87

第九节 蛋白质羧基化合物的检测88

一、氢硼化物还原法89

二、DNPH比色法90

三、免疫印迹法91

第十节 非酶糖化蛋白的测定94

一、硫代巴比妥酸法95

二、果糖胺测定96

三、改良过碘酸钠法97

四、葡萄糖苯脎分光光度法(GPS法)98

五、荧光法99

六、电泳及等电聚焦法100

1.等电聚焦电泳法100

2.琼脂糖电泳法101

七、离子交换层析法102

八、亲和层析法102

九、放射免疫法(RIA)103

十、酶联免疫测定法(ELISA)103

第五章 超氧化物歧化酶106

第一节 酶活性测定106

一、直接法106

2.肾上腺素法107

1.脉冲辐射分析法107

3.改良Marklund法108

4.联苯三酚自氧化法110

5.没食子酸法112

6.6-羟多巴胺法113

7.亚硫酸盐法114

二、一般化学法114

1.细胞色素C还原法(McCord法)114

2.核黄素-NBT还原法117

3.黄嘌呤氧化酶-NBT还原法118

4.MTT法120

5.亚硝酸盐形成法121

6.化学发光法123

7.碱性二甲亚砜法125

8.四硝基甲烷还原法126

三、光氧化增强法126

四、电化学法128

五、极谱氧电极法128

六、免疫学方法130

1.液相竞争放免法(RIA)130

2.化学发光免疫分析法(CLIA)132

3.ELISA方法134

七、电泳法135

八、原位法136

1.氰化物抑制法138

一、MnSOD活性的测定138

第二节 MnSOD、FeSOD的鉴别与活力测定138

2.SDS法139

3.不同pH值法139

4.DDC法139

一、CuZnSOD的纯化140

1.从牛红细胞提纯CuZnSOD140

二、FeSOD活性测定140

5.其他方法140

第三节 SOD的纯化140

2.从植物中提取CuZnSOD141

3.从酵母中提取SOD141

二、MnSOD的纯化142

三、FeSOD的纯化143

四、SOD纯度鉴定144

一、DTNB直接显色法147

第六章 谷胱甘肽过氧化物酶147

第一节 含硒酶活性测定147

二、酶偶联法151

三、荧光测定法152

四、PHGPx酶活性测定方法155

第二节 不含硒酶活性测定155

第三节 细胞外GPx酶含量测定155

第四节 酶的提取与纯化156

一、亲和层析法156

二、一般层析法159

三、人红细胞GPx的纯化160

第七章 过氧化氢酶163

第一节 活性测定163

一、钼酸铵比色法163

二、快速简便法165

三、紫外速率直接法166

四、改良比色法168

五、过硼酸盐底物法169

六、化学发光法170

七、氧电极法171

八、检压测定法173

九、滴定法175

十、原位负染色法176

第二节 提取与纯化177

一、酵母过氧化氢酶的提纯177

二、组织过氧化氢酶的提纯179

第八章 谷胱甘肽代谢酶类182

第一节 谷胱甘肽还原酶182

一、活性测定182

1.分光光度法182

2.DTNB183

3.电泳法185

4.荧光法186

二、分离与纯化188

1.红细胞谷胱甘肽还原酶的纯化188

2.组织谷胱甘肽还原酶的纯化190

3.酵母谷胱甘肽还原酶的提纯191

4.两步层析法192

第二节 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶192

一、活性测定--放射性同位素法193

二、提取与纯化195

第三节 谷胱甘肽合成酶196

一、活性测定--放射性同位素法196

二、提取与纯化198

第九章 谷胱甘肽转硫酶201

第一节 活力测定201

一、动力学法201

二、CDNB比色法202

三、mBrB法204

四、BPO法205

五、NBD-Cl法206

第二节 同工酶分析207

一、放射免疫分析207

二、免疫金银法208

三、等电点聚焦电泳法209

四、碘染凝胶法210

五、负染凝胶法211

第三节 分离与纯化212

一、Reddy s法213

二、碱性GST的纯化215

三、酸性GST的纯化215

1.亲和层析法215

2.改良Kwak和Bark法217

第十章 一氧化氮与一氧化氮合酶221

第一节 一氧化氮含量测定221

一、微电极法221

二、EPR法223

三、Griess试剂法224

四、改良微盘测定法226

五、化学发光法228

六、液体充气鲁米诺化学发光法229

七、荧光分光光度法231

八、NACNO荧光分析法233

九、硝酸盐还原酶法234

十、硝酸盐还原酶偶联法235

十一、示波极谱测定法237

十二、催化光度法239

十三、全血NO代谢产物的测定240

十四、流式细胞术测定NO含量242

一、NOS样品制备243

1.组织匀浆243

第二节 NOS活性测定243

2.Bredt s法纯化NOS244

3.Mayer s法纯化NOS244

4.硫酸铵沉淀法制备NOS245

二、测定方法246

1.化学发光法246

2.放射强度测定法247

3.血红蛋白法249

4.荧光分析法250

5.薄层层析法251

6.NADP+检测法252

一、黄递酶组化法253

第三节 NOS组化技术253

二、荧光染色法254

第四节 ONOO？的检测255

一、直接法255

二、间接法256

一、改良比色法259

第一节 还原型谷胱甘肽测定259

第十一章 谷胱甘肽259

二、Beutler改良法260

三、荧光测定法261

四、改良荧光法262

五、高效液相层析法263

第二节 总谷胱甘肽的测定264

一、循环法264

二、Tietze s法266

第三节 氧化型谷胱甘肽的测定268

一、乙二醛酶Ⅰ法268

二、NEM过柱法269

三、碱水解法269

四、荧光法270

五、2-VP法271

第十二章 其他抗氧化物质273

第一节 总抗氧化能力273

一、ORAC测定273

二、FRAP测定275

三、TRAP测定276

第二节 抗坏血酸277

一、分光光度法278

1.动力学比色法279

2.DNPH比色法280

3.固蓝盐B分光光度法282

二、荧光分析法283

三、气相色谱法285

四、氧化酶法285

五、高效液相色谱法285

1.HPLC/uv法286

2.HPLC/EC法286

第三节 维生素E287

一、荧光法287

二、HPLC-分光光度法289

三、HPLC-荧光分析法290

第四节 辅酶Q292

第五节 铜蓝蛋白293

一、DPPD法293

二、TMB法294

三、ELISA法295

四、放免法296

五、火箭电泳法297

第六节 尿酸298

一、磷钨酸还原法298

二、Fe2+氧化比色法298

三、结晶紫比色法300

四、340mm分析法301

五、293mm分析法302

六、DHBS比色法303

七、耗氧率分析法304

第十三章 细胞氧化损伤307

第二节 DNA损伤检测308

一、DNA断裂的定性分析308

二、DNA断裂的定量分析308

1.二苯胺法308

2.荧光分光光度法309

3.Comet法310

第三节 细胞膜流动性测定311

一、RT-PCR315

第十四章 氧化应激与基因表达315

第一节 基因表达的检测315

二、斑点(狭缝)杂交316

三、其他方法321

第二节 NF-kB的检测321

一、EMSA法321

二、共聚焦显微镜法322

三、原位法323

第十五章 相关研究方法326

一、脂质体转染方法326

二、Lowry s法测蛋白327

三、细胞数定量328

附录329

一、离心机转速与离心力的换算329

二、常用缓冲液的配制329

1.常用缓冲液介质的pKa值329

2.Tris-HCl缓冲液329

3.温度对50mmol/L Tris-HCl缓冲液pH值的影响330

4.磷酸钾缓冲液331

5.磷酸钠缓冲液331

6.甘氨酸缓冲液331

7.硼砂-盐酸缓冲液332

10.柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液333

9.巴比妥钠-盐酸缓冲液333

8.硼砂-硼酸缓冲液333

11.柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液334

12.醋酸盐缓冲液334

13.碳酸盐缓冲液334

14.咪唑-HCl缓冲液335

15.KCl-HCl缓冲液335

16.KCl-NaOH缓冲液336

17.马来酸氢钠-NaOH缓冲液336

18.平衡盐溶液336

1.放射性核素测量单位337

2.放射性核素衰变表337

四、放射性核素数据337

三、重铬酸盐清洁液配制方法337

五、常见市售酸碱的浓度338

六、常用电泳缓冲液338

七、凝胶加样缓冲液339

八、常用层析数据340

1.常用阴离子交换纤维素340

2.阳离子交换纤维素340

3.琼脂糖凝胶的技术数据340

4.葡聚糖凝胶(Sephadex)的技术数据340

5.各种凝胶允许的最大操作压341