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第一篇 生物化学实验室规则及基本操作1

1 实验室规则1

2 预习报告要求1

3 实验记录要求1

4 实验报告书写要求及参考格式2

4．1实验报告的格式2

4．2实验报告的内容2

4．3实验结果3

5 仪器的清洗与清洁3

5．1初用玻璃仪器的清洗3

5．2使用过的玻璃仪器的清洗3

5．3石英和玻璃比色皿的清洗3

5．4塑料器皿的清洗3

5．5玻璃和塑料器皿的干燥4

6 清洗液的配制及使用4

6．1铬酸洗液的配制4

6．2其他洗涤液4

7 移液器的种类和使用4

7．1滴管4

7．2移液管（吸管）5

7．3微量进样器5

7．4自动取液器5

8 定量容器的种类和使用6

8．1量筒、量杯6

8．2容量瓶7

9 溶液的混匀7

9．1搅拌7

9．2旋转7

9．3弹打7

10 实验室意外情况及处理措施8

10．1着火8

10．2爆炸8

10．3中毒9

10．4外伤9

10．5触电10

第二篇 基本生化实验技术11

1 分光光度技术11

1．1紫外和可见光光谱11

1．2荧光光度分析17

1．3原子吸收光谱18

2 电泳技术19

2．1电泳技术总论19

2．2纸电泳和乙酸纤维薄膜电泳23

2．3聚丙烯酰胺凝胶电泳23

2．4琼脂糖凝胶电泳28

2．5免疫电泳29

2．6等电聚焦电泳30

2．7毛细管电泳31

2．8电泳结果处理34

3 色谱技术36

3．1色谱技术概述36

3．2凝胶色谱42

3．3离子交换色谱50

3．4亲和色谱56

3．5具体的一些色谱方法62

3．6高效液相色谱66

4 PCR技术70

4．1 PCR基本原理70

4．2 PCR的基本过程70

4．3 PCR实验技术要点71

4．4提高PCR扩增特异性73

5 膜分离技术74

5．1透析74

5．2超滤75

6 免疫技术——酶联免疫吸附测定法（ELISA）76

6．1原理76

6．2操作要点76

7 生物大分子制备技术81

7．1概述81

7．2生物大分子制备的前处理82

7．3生物大分子的分离纯化84

7．4样品的保存85

第三篇 实验部分87

第一部分 糖类实验87

实验一 还原糖和总糖的测定（3，5-二-硝基水杨酸法）87

实验二 可溶性总糖的蒽酮比色法测定88

实验三 费林试剂法测定总糖89

实验四 磷钼酸比色法测定血糖91

实验五 黏多糖——肝素钠效价的测定93

实验六 淀粉的提取及性质实验94

实验七 淀粉与纤维素的测定95

实验八 肝糖原的提取及鉴定97

实验九 果胶的提取与胶冻的制备98

实验十 可溶性糖的硅胶G薄层色谱99

实验十一 糖的聚酰胺薄层色谱101

实验十二 细菌细胞壁糖的薄层色谱102

实验十三 葡萄糖-1-磷酸的制备及其纯度的测定104

第二部分 脂类实验107

实验十四 脂肪的碱水解及组分鉴定107

实验十五 粗脂肪的定量测定——索氏抽提法108

实验十六 皂化值的测定109

实验十七 酸值的测定110

实验十八 碘值的测定111

实验十九 卵磷脂的提取及鉴定113

实验二十 磷硫铁法测定血清胆固醇114

实验二十一 分光光度法测定胆红素（改良J-G法）115

实验二十二 红细胞膜的制备及其成分分析（磷脂、胆固醇）116

第三部分 氨基酸和蛋白质类实验120

实验二十三 氨基酸的纸色谱120

实验二十四 薄层色谱法分离氨基酸122

实验二十五 甲醛滴定法测定氨基酸123

实验二十六 华勃氏呼吸计法测定L-谷氨酸124

实验二十七 旋光法测定谷氨酸127

实验二十八 蛋白质的沉淀反应、颜色反应、两性反应、电荷及等电点的测定128

实验二十九 粗蛋白的定量测定——微量凯氏定氮法132

实验三十 紫外光吸收法测定蛋白质含量135

实验三十一 双缩脲法测定蛋白质含量137

实验三十二 考马斯亮蓝G-250法（Bradford法）测定蛋白质含量138

实验三十三 Folin-酚试剂法（Lowry法）测定蛋白质139

实验三十四 尿素对蛋白质的变性作用141

实验三十五 蛋白质DNS分析法（DNS—Cl膜色谱技术）142

实验三十六 乙酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质144

实验三十七 垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质146

实验三十八 等电聚焦电泳测定蛋白质等电点147

实验三十九 SDS-PAGE电泳测定蛋白质相对分子质量149

实验四十 凝胶色谱法测定蛋白质相对分子质量151

实验四十一 酪蛋白的提取152

实验四十二 植物叶蛋白的提取153

实验四十三 细胞色素C的制备及其测定155

第四部分 核酸类实验158

实验四十四 质粒DNA的碱裂解法提取与纯化158

实验四十五 植物组织中核酸的提取和测定160

实验四十六 酵母RNA的分离与组分鉴定162

实验四十七 DNA的琼脂糖凝胶电泳163

实验四十八 RNA的聚丙烯酰胺凝胶电泳165

实验四十九 DNA重组167

实验五十 PCR聚合酶扩增DNA168

实验五十一 逆转录聚合酶（PCR）链反应169

第五部分 酶类实验170

实验五十二 过氧化氢酶和过氧化物酶的作用170

实验五十三 温度、pH、激活剂和抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响172

实验五十四 大麦萌发前后淀粉酶活力的比较174

实验五十五 枯草杆菌蛋白酶活力的测定175

实验五十六 转氨酶GPT、 GOT活性的测定177

实验五十七 脲酶的动力学研究178

实验五十八 糖化型淀粉酶活力的测定183

实验五十九 蛋清溶菌酶的制备及活力测定184

实验六十 正交法测定对酶活力影响的几种因素185

实验六十一 碱性磷酸酶的分离与纯化188

实验六十二 结晶乳酸脱氢酶（LDH）的制备190

实验六十三 琥珀酸脱氢酶的活性测定及丙二酸的抑制作用191

实验六十四 辣根过氧化物酶的制备及酶比活力的测定192

实验六十五 发色底物测定大曲中α-葡萄糖苷酶活力195

实验六十六 酵母蔗糖酶的纯化及性质研究197

实验六十七 固定化酵母细胞及蔗糖酶的检测201

实验六十八 亲和色谱法纯化胰蛋白酶202

第六部分 维生素类实验205

实验六十九 维生素A的测定（三氯化锑比色法）205

实验七十 还原型维生素C的测定206

实验七十一 总维生素C的测定——2，4-二硝基苯肼比色法207

实验七十二 荧光法测定维生素B2（核黄素）209

实验七十三 高效液相色谱法测定脂溶性维生素210

第七部分 代谢类实验212

实验七十四 肌糖原的酵解作用212

实验七十五 发酵过程中无机磷的利用214

实验七十六 糖酵解中间产物的鉴定215

实验七十七 氨基转移反应的定性鉴定216

实验七十八 脂肪酸的β-氧化218

第八部分 其他实验220

实验七十九 辛酸-硫酸铵法从人血清中纯化免疫球蛋白（IgG）220

实验八十 免疫电泳技术221

实验八十一 ELISA法测定单克隆抗体的效价222

实验八十二 分光光度法测定叶绿素含量224

附录226

附录1 一些常用化合物的溶解度（20℃）226

附录2 酸、碱溶液的配制226

附录3 常用酸碱体积分数、相对密度和物质的量浓度的关系226

附录4 某些有机溶剂的主要物理常数228

附录5 一些常用酸碱指示剂228

附录6 混合指示剂229

附录7 氧化还原染料229

附录8 染料和荧光标准试剂229

附录9 生物发色团230

附录10 某些重要生化物质的摩尔消光系数230

附录11 氨基酸的一些物理常数231

附录12 元素的相对原子质量表232

附录13 调整硫酸铵溶液饱和度计算表（25℃）233

附录14 调整硫酸铵溶液饱和度计算表（0℃）233

附录15 气体干燥剂234

附录16 液体干燥剂234

附录17 易变质及需要特殊方法保存的试剂234

附录18 冷却剂234

附录19 常用缓冲溶液的配制235

参考书目240