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概述3

第一部分　基本理论3

第1章　植物组织培养技术5

1.1 植物组织培养的概念和分类5

1.1.1　植物组织培养的基本概念5

1.1.2　植物组织培养的分类5

1.2.2　细胞的脱分化、再分化和植株再生7

1.2.3　感受态和决定作用7

1.2.1　植物细胞的全能性及其表达7

1.2　植物组织培养的基本原理7

1.2.4　极性及其在分化中的作用8

1.2.5　植物激素在细胞分化中的作用8

1.3　植物组织培养的基本操作技术9

1.3.1 实验室的基本设备和用具9

1.3.2　植物组织培养的一般操作程序9

1.3.3　外植体材料的选择14

1.3.4　材料的培养15

1.3.5　愈伤组织的诱导及形态发生17

1.3.6　植物器官的离体培养18

1.3.7　植物细胞培养23

1.3.8　原生质体培养25

1.3.9　植物培养物的保存31

1.4　植物组织培养技术的应用及展望33

1.4.1　脱毒种苗生产及无性快速繁殖技术33

1.4.2　植物育种及种质资源保存交换33

1.4.3　次生代谢物的生产33

1.4.4　植物的离体显微嫁接技术34

1.4.5　植物细胞的固定化和人工种子技术34

2.1.1　差速离心技术36

2.1 基本原理36

第2章　植物细胞各部分的分级分离36

2.1.2　密度梯度离心技术37

2.2 植物细胞各部分的分离程序38

2.2.1　细胞的匀浆化38

2.2.2　分离纯化程序38

2.2.3　纯度鉴定39

2.3 几种植物细胞组分的分离制备39

2.3.1　原生质体的分离制备39

2.3.2　植物线粒体的制备41

2.3.3　植物叶绿体及其色素蛋白复合体的分离和制备43

2.3.4　植物细胞质膜的分离45

2.3.5　膜脂的提取分离技术47

第3章 植物的水分及低温逆境生理研究技术50

3.1　水分状况指标50

3.1.1　水势50

3.1.2　渗透势51

3.1.3　压力势51

3.1.4　含水量52

3.2.1　水势的测定53

3.2　水分状况的测定53

3.1.5　形态指标53

3.2.2　渗透势的测定56

3.2.3　压力势的测定56

3.2.4　相对含水量的测定56

3.2.5　P-V技术及其在植物水分状况研究中的应用57

3.2.6　植物蒸腾作用的测定59

3.3　植物抗旱性的鉴定61

3.3.1　植物的抗旱性鉴定方法与指标62

3.3.2　抗旱性评定的综合指标—综合评价67

3.4.1　低温处理68

3.4　植物抗寒性的鉴定68

3.4.2　植物抗寒性鉴定的指标69

第4章　光合与呼吸作用研究技术71

4.1 光合作用的测定71

4.1.1　CO2同化速率的测定72

4.1.2　CO2释放速率的测定——氧电极法测定叶片的光合速率77

4.1.3　有机物积累量的测定78

4.2 叶绿素荧光的测定与分析78

4.2.1　测定方法提出的背景78

4.2.2　叶绿素a荧光动力学原理79

4.3 叶绿体光合磷酸化活力的测定81

4.3.1　荧光素酶法81

4.3.2 32P标记法82

4.4 Rubisco的纯化与分析82

4.4.1 Rubisco的纯化方法82

4.4.2 Rubisco蛋白的定量83

4.4.3 Rubisco活性测定83

4.5 呼吸作用的测定84

4.5.1　呼吸速率的测定84

4.5.2　呼吸途径的测定85

5.1 植物激素的提取、分离与纯化87

5.1.1 提取程序87

5.1.2　分离与纯化程序87

第5章　植物激素研究技术87

5.1.3　纯度检验91

5.2　植物激素的检测技术91

5.2.1　生物鉴定法91

5.2.2　仪器检测法92

5.2.3　免疫分析技术92

5.3.1　植物激素免疫组织化学定位的基本原理100

5.3　植物激素的免疫定位技术100

5.3.2　植物激素免疫组织化学定位中存在的问题101

5.3.3　植物激素的固定和标记方法101

第6章　植物次生代谢产物的研究技术104

6.1 植物次生代谢的概念及次生代谢产物的主要类型104

6.1.1　植物次生代谢的概念104

6.1.2　次生代谢产物的主要类型105

6.1.3　与抗病有关的植物次生代谢物107

6.2.2　酚类化合物的合成108

6.2.1　萜类化合物的合成108

6.2 主要次生代谢物的合成途径108

6.2.3　含氮有机化合物109

6.2.4 由糖和糖的衍生物衍生而来的代谢物109

6.2.5 由脂肪酸代谢中的乙酰（乙酰CoA）至丙二酸（丙二酰CoA）聚合途径109

而合成的代谢物109

6.3 次生代谢物的提取分离测定方法110

6.3.1　植物次生代谢产物的提取方法110

6.3.2　次生代谢产物的分离与精制方法112

6.3.3　植物有效成分的活性追踪分离方法117

6.4.1　农作物改良118

6.4　展望118

6.4.2　药用植物的细胞工程与基因工程119

第二部分　实验操作123

专题实验一 植物激素对愈伤组织形成和根芽分化的影响123

专题实验二 高等植物线粒体、叶绿体和原生质膜的分离制备127

2.1 植物线粒体和叶绿体的分离制备127

2.2 两相分配法分离植物细胞原生质膜131

专题实验三 作物抗旱生理指标的测定134

3.1 材料培养134

3.2 离体叶片保水力测定135

3.3 连续升温电导法测定细胞膜透性136

3.4　植物组织含水量和相对含水量（RWC）的测定138

3.5 压力室法测定植物组织水势（ψw）139

3.6 水饱和渗透势法测定叶片渗透调节能力140

3.7 植物根系水力学导度（水导）的测定141

专题实验四 光合与呼吸作用测定143

4.1 植物净光合速率、蒸腾速率及其他相关参数测定143

4.2 蒸腾速率与水分利用效率测定147

4.3 叶绿素荧光动力学参数测定152

4.4 氧电极法测定光合与呼吸速率154

专题实验五　植物激素的提取、分离、纯化及检测157

5.1 植物激素的提取、分离与纯化157

5.2 固相抗体型ELISA分析植物组织中ABA含量159

5.3 固相抗原型ELISA测定IAA含量163

专题实验六 植物逆境与衰老生理指标测定165

6.1 超氧化物歧化酶活性测定165

6.2 植物组织中过氧化氢酶活性测定（紫外吸收法）167

6.3 植物组织中过氧化物酶（POD）活性的测定168

6.4　还原性谷胱甘肽含量的测定170

6.5 可溶性蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝G-250染色法）171

6.6 钼蓝比色法测定植物组织中维生素C含量172

6.7 植物超氧阴离子自由基含量的测定174

6.8 丙二醛含量的测定176

专题实验七 植物次生物质代谢研究178

7.1 苯丙氨酸解氨酶活性测定178

7.2　绿原酸的提取与定量测定179

7.3 总黄酮含量的测定181

7.4　茶多酚含量的测定182

7.5　挥发油含量测定184

附录1 植物组织培养常用培养基配方（mg/L）189

附录189

附录2　常用缓冲液190

附录3　几种渗透溶液的配制表195

附录4 容易变质及需要特殊方法保存的试剂196

附录5　各种冷却剂的组成及冷却效果表196

附录6 常用植物激素及生长调节剂配制保存方法197

附录7　标准剂量单位197

附录8 不同温度下O2与CO2的溶解度199

附录9 离心机转速与相对离心力的换算199