图书介绍
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- 殷冬梅著 著
- 出版社： 北京：中国农业科学技术出版社
- ISBN：9787511604248
- 出版时间：2011
- 标注页数：165页
- 文件大小：23MB
- 文件页数：181页
- 主题词：花生－油酸－基因工程
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图书目录
第一篇 花生脂肪酸代谢的遗传调控与基因工程3
第一章 植物脂肪酸代谢的遗传调控与基因工程3
1.1 脂肪酸的种类及其重要性3
1.1.1 脂肪酸的种类3
1.1.2 植物脂肪酸的生理功能4
1.1.3 植物脂肪酸的食用及工业价值4
1.2 脂肪酸生物代谢途径与调控5
1.2.1 脂肪酸生物代谢途径5
1.2.2 植物脂肪酸代谢调控的基因工程6
第二章 植物脂肪酸脱氢酶的分子生物学研究进展11
2.1 脂肪酸脱氢酶的种类与分布11
2.1.1 植物脂酰ACP脱氢酶12
2.1.2 植物脂酰-脂脱氢酶13
2.2 脂肪酸脱氢酶的克隆与序列分析14
2.3 脂肪酸脱氢酶的催化机理与活性中心17
第三章 RNAi在植物遗传改良中的应用19
3.1 植物的转基因沉默19
3.2 RNAi的产生机制20
3.3 RNAi在植物遗传改良中的应用22
3.3.1 植物的功能基因组学研究22
3.3.2 植物品质的遗传改良24
第四章 花生脂肪酸脱氢酶基因研究进展27
4.1 油酸脱氢酶基因27
4.2 油酸脱氢酶基因的调控表达28
4.3 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）30
第五章 花生遗传转化和再生研究进展33
5.1 花生遗传转化的目的和意义33
5.2 农杆菌介导的转化34
5.3 基因枪介导的转化39
第二篇 花生基因工程实验技术45
第六章 花生总DNA提取45
6.1 目的45
6.2 材料45
6.3 DNA粗提液微量制备45
6.3.1 试剂45
6.3.2 操作46
6.4 DNA提取与纯化46
6.4.1 试剂46
6.4.2 操作步骤46
第七章 花生总RNA提取48
7.1 目的48
7.2 材料48
7.3 一步提取法48
7.3.1 试剂48
7.3.2 操作步骤49
7.4 通用的方法50
7.4.1 试剂50
7.4.2 操作50
第八章 质粒DNA的提取与酶切52
8.1 目的52
8.2 试剂52
8.3 操作步骤52
第九章 核酸提取物纯度及浓度检测55
9.1 目的55
9.2 材料55
9.3 分光光度计法55
9.3.1 操作55
9.4 琼脂糖凝胶电泳法56
9.4.1 试剂56
9.4.2 操作57
第十章 目的基因的PCR扩增59
10.1 目的59
10.2 材料59
10.3 操作59
第十一章 cDNA文库构建61
11.1 目的61
11.2 材料61
11.3 试剂61
11.4 操作62
第十二章 农杆菌法转化外源基因65
12.1 目的65
12.2 材料65
12.3 实验步骤65
第十三章 基因枪法转化外源基因67
13.1 目的67
13.2 材料67
13.3 操作67
第十四章 组织化学染色法检测GUS活性70
14.1 目的70
14.2 材料70
14.3 试剂70
14.4 操作步骤71
第十五章 Southern-Blot73
15.1 目的73
15.2 试剂73
15.3 操作步骤74
15.3.1 基因组DNA的限制酶切74
15.3.2 DNA消化产物的琼脂糖凝胶电泳74
15.3.3 DNA从琼脂糖凝胶转移到固相支持物74
15.3.4 探针标记76
15.3.5 杂交77
15.3.6 洗膜与检测77
15.3.7 放射自显影78
第十六章 Northern印迹杂交79
16.1 目的79
16.2 材料79
16.3 总RNA或mRNA琼脂糖凝胶电泳分离79
16.3.1 试剂79
16.3.2 操作80
16.4 印迹81
16.4.1 操作81
16.5 RNA杂交和显影81
第十七章 外源基因表达的RT-PCR检测83
17.1 目的83
17.2 试剂83
17.3 操作83
第十八章 外源基因整合的原位杂交85
18.1 目的85
18.2 材料85
18.3 试剂85
18.4 操作86
第三篇 花生油酸脱氢酶基因研究成果91
第十九章 花生属脂肪酸脱氢酶基因的克隆和序列分析91
19.1 材料和方法92
19.1.1 试验材料92
19.1.2 RNA提取与RT-PCR扩增92
19.1.3 目的基因片段的克隆与序列测定94
19.1.4 分子系统发育树的分析99
19.2 结果与分析99
19.2.1 花生属FAD2基因的克隆和序列测定99
19.2.2 花生属FAD2基因的序列比较与蛋白分析100
19.2.3 花生属FAD2基因的系统进化关系102
19.3 讨论102
第二十章 花生油酸脱氢酶基因高效表达载体构建与原核表达109
20.1 材料与方法110
20.1.1 菌株与质粒110
20.1.2 酶及试剂110
20.1.3 培养基110
20.1.4 表达载体构建与转化110
20.1.5 外源蛋白的诱导表达111
20.1.6 重组蛋白的提取112
20.1.7 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）112
20.1.8 重组蛋白的纯化114
20.1.9 FAD2活性测定与脂肪酸GC-MS分析114
20.2 结果与分析115
20.2.1 高效表达载体构建115
20.2.2 目的基因在大肠杆菌中的蛋白表达SDS-PAGE分析与纯化115
20.2.3 重组蛋白的功能鉴定117
20.3 讨论118
20.3.1 表达载体与受菌体的选择118
20.3.2 培养条件的优化119
20.3.3 影响脂肪酸脱氢酶表达的其他因素与途径120
第二十一章 花生油酸脱氢酶在酿酒酵母中的表达和功能鉴定121
21.1 材料和方法122
21.1.1 菌株与质粒122
21.1.2 主要试剂122
21.1.3 培养基122
21.1.4 含油酸脱氢酶的表达载体pYES/HO-A的构建124
21.1.5 重组质粒在酿酒酵母中的诱导表达125
21.1.6 重组蛋白的检测126
21.1.7 酵母油脂的脂肪酸分析128
21.2 结果与分析128
21.2.1 重组表达质粒pYES/HO-A的构建和酶切鉴定128
21.2.2 油酸脱氢酶在酿酒酵母中的诱导表达128
21.2.3 酵母油脂的脂肪酸分析129
21.3 讨论131
第二十二章 花生FAD2基因特异表达载体的构建和RNAi对内源基因表达的抑制作用134
22.1 材料与方法135
22.1.1 植物材料135
22.1.2 菌种与质粒136
22.1.3 酶与试剂136
22.1.4 培养基136
22.1.5 PCR引物137
22.1.6 特异表达载体的构建137
22.1.7 根癌农杆菌LBA4404感受态细胞的制备139
22.1.8 冻融法直接转化LBA4404140
22.1.9 菌落PCR140
22.1.10 农杆菌介导的花生遗传转化体系的建立141
22.1.11 转基因花生的分子生物检测142
22.2 结果与分析143
22.2.1 构建FAD2基因反向重复序列表达载体143
22.2.2 建立转化再生体系及筛选Km抗性浓度145
22.2.3 转基因植株的获得147
22.2.4 转化植株的PCR检测148
22.2.5 Real Time PCR检测目的基因的表达149
22.3 讨论152
22.3.1 关于影响农杆菌介导花生遗传转化的因素152
22.3.2 RNA干扰（RNAi）技术在植物基因工程中的应用153
22.3.3 实时荧光定量PCR在基因表达方面的应用153
参考文献155