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第一部分 生物化学实验原理1

第一章 液相层析法的一般原理和操作1

第一节 引言1

第二节 层析法的一般原理2

第三节 洗脱峰不对称性及其原因7

第四节 多组分的分离8

第五节 柱层析系统基本操作方法10

第二章 吸附层析法16

第一节 原理16

第二节 吸附剂的类型及选择16

第三节 溶剂与洗脱剂17

第三章 薄层层析法19

第一节 引言19

第二节 薄层层析原理19

第三节 固定相支持介质的选择20

第四节 薄层层析操作技术22

第五节 薄层层析的定性分析26

第六节 薄层层析的定量分析27

第四章 纸层析法28

第一节 纸层析基本原理28

第二节 影响Rf值的主要因素28

第三节 实验操作技术30

第五章 离子交换层析法36

第一节 基本原理36

第二节 离子交换树脂的结构和常用的离子交换剂38

第三节 离子交换剂的选择40

第四节 树脂的处理、转型、再生与保存42

第五节 离子交换层析法的应用43

第六节 离子交换纤维素43

第六章 凝胶层析法47

第一节 引言47

第二节 基本原理47

第三节 凝胶的条件和类型49

第四节 凝胶层析的实验技术53

第五节 影响凝胶层析的主要因素55

第七章 亲和层析法57

第一节 基本原理57

第二节 配基和载体的选择57

第三节 亲和吸附剂的制备方法59

第四节 亲和层析技术63

第五节 亲和层析应用举例65

第六节 金属螯合亲和层析66

第八章 电泳69

第一节 电泳基本原理69

第二节 电泳的分类74

第三节 醋酸纤维薄膜电泳原理75

第四节 以琼脂（糖为支持物的电泳75

第五节 以聚丙烯酰胺凝胶为支持物的电泳82

第六节 染色方法100

第九章 分光光度法107

第一节 原理107

第二节 光吸收的测定109

第十章 生物大分子的分离纯化与鉴定117

第一节 引言117

第二节 生物大分子制备的前处理118

第三节 分离纯化120

第四节 生物大分子的浓缩、干燥和保存121

第五节 生物大分子含量的测定和纯度鉴定123

第二部分 生物化学实验125

实验1 糖的呈色反应和还原糖的检验125

实验2 糖的定量测定131

实验3 粘多糖-肝素钠效价的测定133

实验4 油脂皂化与皂化值的测定136

实验5 脂肪碘值的测定139

实验6 血清胆固醇的测定磷硫铁法142

实验7 脂类组成对脂类单分子层通透性的影响145

实验8 去污剂及膜活性试剂对红血球细胞膜的作用147

实验9 蛋白质和氨基酸的呈色反应150

实验10 蛋白质的沉淀、变性反应156

实验11 蛋白质浓度测定（1）——总氮量的测定160

实验12 蛋白质浓度测定（2）——双缩脲法165

实验13 蛋白质浓度测定（3）——Folin-酚测定法168

实验14 蛋白质浓度测定（4）——紫外线（UV）吸收法171

实验15 蛋白质浓度测定（5）——考马斯亮蓝染色法174

实验16 氨基酸的分离与鉴定——滤纸层析法177

实验17 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳182

实验18 聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离血清蛋白189

实验19 聚丙烯酰胺等电聚焦电泳197

实验20 蛋白质分子量测定（1）——葡聚糖凝胶薄层层析法204

实验21 蛋白质分子量测定（2）——凝胶过滤层析法207

实验22 蛋白质分子量测定（3）——SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳216

实验23 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（银染色法）224

实验24 脂蛋白的分离——琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶电泳227

实验25 蛋白质多肽链N-末端氨基酸测定——DNS-Cl法232

实验26 细胞色素C的制备和测定240

实验27 酵母RNA提取与地衣酚显色测定法257

实验28 猪脾脏DNA提取与二苯胺测定法260

实验29 植物DNA的提取264

实验30 RNA水解及其产物核苷酸聚酰胺薄膜层析266

实验31 核酸浓度测定（1）——定磷法270

实验32 核酸浓度测定（2）——紫外线（UV）吸收法275

实验33 质粒DNA的微量制备（碱裂解法、煮沸法）278

实验34 DNA的琼脂糖凝胶电泳284

实验35 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化290

实验36 维生素A,B1和B2的定性鉴定295

实验37 维生素B1的荧光测定法298

实验38 维生素B2（核黄素）的荧光测定法300

实验39 维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）302

实验40 肾上腺素的提取与鉴定306

实验41 酶的特性——底物专一性308

实验42 脂肪酶活性测定311

实验43 血清谷丙转氨酶（SGPT）测定（King氏法）313

实验44 超氧化物歧化酶的分离纯化318

实验45 超氧化物歧化酶活性染色鉴定法324

实验46 影响酶促反应速度的因素（1）——底物浓度、米氏常数（Km）的测定327

实验47 影响酶促反应速度的因素（2）——激活剂与抑制剂333

实验48 影响酶促反应速度的因素（3）——pH、最适pH335

实验49 影响酶促反应速度的因素（4）——温度、最适温度338

实验50 酯酶的分离、纯化与活性测定341

实验51 亲和层析法分离乳酸脱氢酶346

实验52 乳酸脱氢酶活力测定351

实验53 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离乳酸脱氢酶同工酶（活性染色鉴定法）354

实验54 尿激酶的纯化及活性测定358

实验55 辅酶I（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，NAD+）含量测定363

实验56 辅酶A含量测定366

实验57 胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响369

实验58 肌糖元的酵解作用374

实验59 用正交法测定几种因素对酵母发酵作用的影响377

实验60 免疫扩散和免疫电泳381

实验61 酶联免疫吸附测定法390

第三部分 附录397

一、实验室安全及防护知识397

二、试剂及试剂配制与保存400

三、一些常用单位410

四、单位与浓度的表示及溶液浓度的调整411

五、实验误差与提高实验准确度的方法415

六、实验记录与实验报告419

七、常用数据表423

八、层析、电泳材料434

九、其他附表444

十、常用仪器的使用方法447