图书介绍
同济博士论丛 拟南芥中RNA指导的DNA甲基化PDF|Epub|txt|kindle电子书版本网盘下载
- 刘海亮，祝建，朱健康著 著
- 出版社： 上海：同济大学出版社
- ISBN：9787560870243
- 出版时间：2017
- 标注页数：98页
- 文件大小：24MB
- 文件页数：114页
- 主题词：脱氧核糖核酸－甲基化－研究
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图书目录
第1章 绪论1
1.1 RNA指导的DNA甲基化1
1.2 siRNA的产生1
1.3 DNA甲基转移酶4
1.3.1 MET14
1.3.2 CMT34
1.3.3 重新甲基化酶DRM及不对称甲基化6
1.3.4 DNA甲基化复合体7
第2章 材料与方法12
2.1 实验材料12
2.2 方法13
2.2.1 植物总DNA的提取（CTAB法）13
2.2.2 植物总RNA提取（RNeasy Plant Mini Kit,QIAGEN）13
2.2.3 cDNA合成（SuperScript.Ⅲ First-Strand Synthesis System,Invitrogen）14
2.2.4 感受态的制备与转化15
2.2.5 DNA的回收（离心柱型普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒QIAGEN）17
2.2.6 RNA分析18
2.2.7 DNA甲基化分析19
2.2.8 6xHis-tagged蛋白质纯化（Ni-NTA Fast Start Kit,QIAGEN）19
2.2.9 位点突变（QuikChange Site-Directed Mutagenesis Kit,Stratagene）20
2.2.10 凝胶阻滞分析（Electrophoretic mobility shift assay,EMSA）22
2.2.11 免疫共沉淀24
2.2.12 免疫荧光法和显微镜25
2.2.13 植物染色体蛋白的免疫染色27
2.2.14 染色质免疫沉淀28
第3章 结果与分析32
3.1 通过筛选ros1的抑制子，确定了RDM1是转录基因沉默途径中的一个新成员32
3.1.1 ROS1：植物中去甲基化酶的发现32
3.1.2 在ros1突变体背景下，rdm1突变体抑制了转基因以及其内源基因的转录基因沉默34
3.1.3 rdm1-1突变体阻止了RD29A启动子24 nt siRNAs的产生以及抑制了启动子的超甲基化37
3.1.4 rdm1突变体减少了siRNAs的产生，提高了RdDM途径内源基因的表达水平39
3.1.5 rdm1突变体减少了RdDM途径内源基因的非CG甲基化水平41
3.2 RDM1基因的分离和功能分析45
3.2.1 RDM1编码一个小的核蛋白45
3.2.2 RDM1结合单链甲基化的DNA49
3.3 RDM1是RdDM受体复合体蛋白中的一个组成部分53
3.3.1 RDM1与AGO4，Pol Ⅱ和DRM2相关联53
3.3.2 RDM1与AGO4，Pol Ⅱ和DRM2共定位55
第4章 RDM3和RDM461
4.1 通过筛选ros1的抑制子，确定了RDM3，RDM4是转录基因沉默途径中的另外两个新成员61
4.2 RDM3与AGO4，NRPE1相关联，共定位65
4.3 RDM4与Pol Ⅱ，Pol Ⅴ相关联，共定位66
第5章 结论与讨论69
5.1 rdm1突变体对于重新甲基化和siRNAs的影响69
5.2 RDM1是RdDM受体复合物中的一员及其可能的功能模式70
5.3 RDM3和RDM472
参考文献73
附录A RDM1的同源二聚体和rdm1-4突变体的特性84
附录B DNA探针和引物87
附录C 彩图91
后记97