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第一章　绪论1

一、生化分离技术发展的历史和地位1

二、生化分离技术的研究范畴2

三、生化分离技术的应用及发展趋势5

思考题7

参考文献7

第二章　生物样品的预处理8

第一节　概述8

第二节　动植物材料预处理8

一、植物组织提取物的制备8

二、动物组织提取物的制备12

三、细菌中重组蛋白的提取制备13

第三节　细胞的破碎与分离16

一、概述16

二、常用的几种破碎方法16

三、细胞破碎技术研究的发展方向21

第四节　沉淀技术21

一、概述21

二、沉淀方法22

第五节　预处理技术实例32

一、纳米级微生物细胞破碎原理及实例32

二、β-环糊精共沉淀分离法33

三、壳聚糖沉淀分离法33

思考题33

参考文献34

第三章　膜分离技术35

第一节　概述35

一、发展史35

二、作用及存在问题35

三、分类和定义36

第二节　技术原理39

一、压力特征39

二、浓差极化40

三、膜分离理论41

四、膜的截留能力41

五、膜的污染42

六、膜组件的选择43

七、膜的选择及使用43

第三节　微滤技术45

一、概述45

二、膜的分类45

三、膜的特点和分离机理46

四、膜的污染和清洗47

第四节　超滤技术47

一、概述47

二、原理48

三、问题及解决措施48

四、膜的改性48

第五节　纳滤技术49

一、概述49

二、分离机理50

三、纳滤膜51

第六节　超-微滤操作技术51

一、预处理51

二、膜的操作52

三、膜的清洗和膜性能的再生55

第七节　膜分离技术的应用56

一、微滤技术应用56

二、超滤技术应用57

三、纳滤技术应用59

思考题60

参考文献60

第四章　色谱分离技术62

第一节　概述62

一、色谱的基本概念62

二、色谱法的分类63

第二节　吸附色谱简介64

一、吸附色谱影响因素64

二、羟基磷灰石色谱方法介绍65

第三节　凝胶过滤色谱67

一、凝胶过滤色谱原理68

二、凝胶过滤色谱介质70

三、凝胶过滤色谱实验技术78

四、凝胶过滤色谱的应用83

第四节　离子交换色谱84

一、离子交换色谱相关理论85

二、离子交换色谱介质（离子交换剂）89

三、离子交换色谱实验技术96

四、离子交换色谱的应用109

第五节　亲和色谱110

一、基本原理110

二、亲和色谱配体111

三、亲和吸附剂112

四、亲和色谱实验技术119

五、亲和色谱的特殊类型122

六、亲和色谱的应用132

第六节　反相色谱134

一、反相色谱原理135

二、反相色谱介质138

三、反相色谱流动相141

四、反相色谱实验技术144

五、反相色谱的应用148

第七节　疏水作用色谱150

一、疏水作用色谱基本原理150

二、疏水作用色谱介质153

三、疏水作用色谱实验技术155

四、疏水作用色谱的应用158

第八节　色谱聚焦简介159

一、机制简介160

二、多组分缓冲剂与多缓冲离子交换剂162

三、实验要点163

思考题165

参考文献166

第五章　电泳技术168

第一节　概述168

一、基本原理168

二、凝胶支持介质170

三、检测方法171

四、电泳仪器172

第二节　天然聚丙烯酰胺凝胶电泳173

一、基本原理173

二、天然聚丙烯酰胺凝胶电泳的类型174

三、影响分离效果的因素174

四、蛋白质分子量的测定176

五、天然聚丙烯酰胺凝胶电泳的实验方法176

六、天然聚丙烯酰胺凝胶电泳的应用范围180

第三节　十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳180

一、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳的分离原理180

二、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳的类型181

三、影响分离效果的因素181

四、蛋白质亚基分子量的测定182

五、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳的实验方法182

六、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳的应用范围183

第四节　等电聚焦184

一、原理184

二、载体两性电解质和pH梯度的形成185

三、载体两性电解质等电聚焦方法186

四、固相pH梯度介质及其pH梯度的形成189

五、固相pH梯度等电聚焦方法191

六、等电聚焦系统的选择192

七、等电聚焦的应用范围193

第五节　双向电泳193

一、样品制备193

二、等电聚焦193

三、缓冲液置换195

四、梯度十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳195

五、检测196

六、蛋白质图谱分析196

七、应用196

第六节　免疫电泳196

一、原理196

二、免疫电泳类型196

三、免疫电泳技术198

四、电泳方法199

五、应用200

第七节　蛋白质印迹200

一、原理200

二、试验材料的选择202

三、蛋白质印迹试验方法203

四、应用204

第八节　毛细管电泳205

一、原理205

二、毛细管电泳的主要类型206

三、毛细管电泳仪208

四、影响毛细管电泳分离的主要因素209

五、毛细管电泳过程210

六、毛细管电泳的应用210

思考题210

参考文献211

第六章　其他分离技术212

第一节　离心分离技术212

一、概述212

二、基本原理和计算219

三、超离心技术225

第二节　泡沫分离技术229

一、分类229

二、基本原理230

三、操作方式及其影响因素231

四、泡沫分离的应用233

第三节　膜分离集成技术234

一、概述234

二、原理和特点234

三、膜色谱介质材料及其组件236

四、膜色谱的制备237

五、膜色谱的应用238

第四节　模拟移动床简介240

一、概述240

二、工作原理240

三、模拟移动床模型241

四、模拟移动床的应用242

思考题242

参考文献243

第七章　分离方案的设计244

第一节　概述244

第二节　分离的主要流程245

一、建立分析方法245

二、提取材料选择246

三、提取方法选择246

四、分离纯化方法的探索248

五、均一性的鉴定248

第三节　分离技术的选择和组合248

一、单元分离技术的选择248

二、融合技术或称集成分离技术249

三、分离技术组合方案的选择原则253

第四节　典型生物分子分离实例分析254

一、蛋白质（酶）的分离纯化与鉴定254

二、核酸的分离纯化与鉴定261

三、多糖的分离纯化与鉴定265

四、小分子物质的分离与鉴定268

思考题273

参考文献274

附录　生化分离实验部分275

系列实验1　凝胶色谱法测定蛋白质相对分子质量275

一、实验目的275

二、实验原理275

三、实验器材和试剂275

四、实验操作276

五、实验结果分析与处理277

系列实验2　酵母蔗糖酶的提取与纯化278

一、实验目的278

二、实验过程278