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目录3

第二版前言3

第一版前言3

第一篇　生化分离技术3

第一章　提取与沉淀分离技术3

第一节　细胞破碎3

一、机械破碎法3

二、物理破碎法4

三、化学破碎法5

四、酶促破碎法6

第二节　提取6

一、提取的方法7

二、影响提取的因素8

第三节　沉淀分离9

一、盐析沉淀法9

二、等电点沉淀法14

三、有机溶剂沉淀法14

五、金属盐沉淀法15

四、复合沉淀法15

六、选择性变性沉淀法16

第四节　实验16

实验1-1　大肠杆菌细胞的超声波破碎16

实验1-2　枯草杆菌碱性磷酸酶的提取与盐析17

实验1-3　枯草杆菌DNA的提取与分离20

实验1-4　酵母RNA的提取与分离21

实验1-5　大蒜细胞SOD的提取与分离22

实验1-6　大鼠肝rRNA的提取与分离24

一、非膜过滤的分类26

第二章 过滤与膜分离技术26

第一节　非膜过滤26

二、非膜过滤的操作过程27

第二节　膜分离技术28

一、膜分离的分类28

二、膜分离的操作过程及其控制30

第三节　实验32

实验2-1 胰凝乳蛋白酶的透析脱盐32

实验2-2 糖化酶的超滤分离33

二、有机溶剂萃取的操作过程36

一、有机溶剂的选择36

第三章　萃取分离技术36

第一节　有机溶剂萃取36

第二节　双水相萃取37

一、双水相萃取的原理37

二、双水相萃取的操作过程38

第三节　超临界萃取40

一、超临界萃取的原理40

二、超临界萃取的操作过程41

二、反胶束萃取的操作过程43

一、反胶束萃取的原理43

第四节　反胶束萃取43

第五节 实验45

实验3-1　青蒿素的超临界萃取分离45

实验3-2　人生长激素的双水相萃取分离46

实验3-3　穿心莲内酯的有机溶剂萃取47

第四章　层析分离技术49

第一节　吸附层析49

一、吸附层析原理49

二、吸附柱层析50

三、聚酰胺薄膜层析54

四、其他吸附层析54

第二节　分配层析55

一、纸层析55

二、薄层层析60

三、气相层析63

第三节　离子交换层析72

一、离子交换剂的选择与处理72

二、离子交换层析的操作过程75

第四节　凝胶层析76

一、凝胶层析的基本原理76

二、凝胶的选择与处理78

三、凝胶层析操作过程80

第五节　亲和层析82

一、亲和层析母体和配基83

二、亲和层析方法83

二、pH梯度的形成86

一、交换剂和缓冲液体系86

第六节　层析聚焦86

三、层析聚焦的操作过程87

第七节　实验88

实验4-1　蛋白质溶液的凝胶层析脱盐88

实验4-2　氨基酸的纸层析89

实验4-3　核苷酸的离子交换层析91

实验4-4　胰蛋白酶的亲和层析93

实验4-5　凝胶层析测定蛋白质的相对分子质量95

实验4-6　DNS-氨基酸的聚酰胺薄膜层析97

实验4-7　醇酯成分的气相层析98

实验4-8　胆酸混合液的薄层层析101

第五章　电泳技术103

第一节　电泳的基本原理103

第二节　纸电泳105

一、缓冲液的选择105

二、滤纸的选择与剪裁105

三、电泳操作要点105

第三节　薄层电泳107

第四节　薄膜电泳108

第五节　凝胶电泳109

一、聚丙烯酰胺凝胶的制备原理109

二、不连续电泳中样品压缩成层的原理111

三、SDS-凝胶电泳原理112

四、凝胶电泳的操作要点112

第六节　等电点聚焦电泳114

一、稳定pH梯度的形成114

二、两性电解质载体115

三、支持pH梯度的介质115

四、等电点聚焦电泳的操作要点116

第七节　实验117

实验5-1　核苷酸的纸电泳117

实验5-2　蛋白质的醋酸纤维薄膜电泳119

实验5-3　DNA的琼脂糖凝胶电泳120

实验5-4　蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳122

实验5-5　SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的相对分子质量124

实验5-6　蛋白质的二元凝胶电泳127

三、超速离心机129

二、高速离心机129

第一节　离心机的选择129

第六章　离心分离技术129

一、常速离心机129

第二节　离心方法的选择131

一、差速离心131

二、密度梯度离心131

三、等密度梯度离心133

一、离心力134

二、离心时间134

第三节　离心条件的确定134

三、温度135

四、pH值135

第四节　实验136

实验6-1　细菌核糖体的分离136

实验6-2　大肠杆菌细胞膜的分离137

实验6-3　RNA的蔗糖密度梯度离心分离138

实验6-4　大鼠肝细胞核的分离139

一、兰-爱农（Lane-Eynon）法143

第一节　糖类的化学检测143

第二篇　生化检测技术143

第七章　化学检测技术143

二、斐林试剂快速法144

三、次碘酸钠法145

四、铜试剂法147

第二节　蛋白质和氨基酸的化学检测148

一、定氮法测定蛋白质的含量148

二、双缩脲试剂法测定蛋白质含量150

三、福林-酚试剂法测定蛋白质含量150

五、蛋白质的氨基酸排列顺序测定——Edman法152

四、蛋白质N-末端氨基酸DNS测定法152

六、蛋白质N-末端氨基酸FDNB测定法156

七、茚三酮显色法测定氨基酸含量157

八、甲醛滴定法测定氨基酸159

第三节　蛋白质的免疫化学检测159

一、基本概念与原理159

二、蛋白质的免疫化学检测方法160

第四节　核酸的化学检测162

一、定磷法测定核酸含量162

二、二苯胺法测定DNA含量163

三、地衣酚法测定RNA含量164

第五节　实验164

实验7-1　斐林试剂置换法测定还原糖164

实验7-2　葡萄糖淀粉酶的活力测定166

实验7-3　微量凯氏定氮法测定总氮量167

实验7-4　福林-酚试剂法测定蛋白质含量169

实验7-5　丹磺酰化法分析蛋白质N-末端氨基酸170

实验7-6　异硫氰酸苯酯分析法测定肽链的氨基酸排列次序172

实验7-7　茚三酮显色法测定氨基酸含量174

实验7-8　双向免疫扩散法测定抗血清效价175

实验7-9　定磷法测定核酸含量176

实验7-10　地衣酚显色法测定RNA含量178

实验7-11　二苯胺显色法测定DNA含量179

第八章　光学检测技术181

第一节　旋光检测技术181

一、原理181

二、操作要点182

第二节　荧光检测技术182

一、邻苯二甲醛荧光分析法测定氨基酸183

二、荧光胺荧光分析法测定肽含量184

第三节　分光光度检测技术185

一、原理185

二、操作要点186

第四节　实验188

实验8-1　旋光法测定味精的纯度188

实验8-2　荧光法测定核黄素含量189

实验8-3　荧光法测定氨基酸含量190

实验8-4　紫外吸收法测定核酸含量191

实验8-5　紫外吸收法测定蛋白质含量192

第九章　气体检测技术194

第一节　华勃氏呼吸仪检压法195

第二节　范·斯莱克检测仪测定α-氨基酸含量198

第三节　实验198

实验9-1　酵母细胞耗氧量的测定198

实验9-2　华勃氏呼吸仪测定L-谷氨酸脱羧酶活力199

实验9-3　华勃氏呼吸仪测定L-谷氨酸含量201

一、毒性试验203

第一节　安全性试验203

第十章　生物检测技术203

二、局部刺激性试验205

三、溶血试验205

四、热原试验205

五、过敏试验206

第二节　生长抑制物质的生物效价测定206

一、稀释法207

二、扩散法207

第三节　生长促进物质的生物效价检测209

四、滴定法210

实验10-1　卡那霉素的效价测定210

第四节　实验210

一、稀释法210

三、比浊法210

二、扩散法210

实验10-2　二环素的杀菌能力测定212

实验10-3　细胞病变抑制法测定干扰素的效价213

实验10-4　热原试验215

二、放射性同位素的衰变与射线217

一、放射性同位素217

第十一章　放射性同位素检测技术217

第一节　基本知识217

三、衰变规律218

四、放射线的防护219

第二节　放射性同位素的检测219

一、放射自显影技术220

二、盖革计数管探测220

三、闪烁计数器探测221

第三节　放射性同位素的搀入223

第四节　实验224

实验11-1　γ-32P-ATP的酶促合成224

实验11-2　3H-蛋白质的生物合成225

实验11-3　3H-蛋白质凝胶的放射荧光显影225

第三篇　酶、基因和细胞操作技术229

第十二章　酶技术229

第一节　酶生物合成的调节技术229

一、酶的诱导合成229

二、酶生物合成的阻遏231

第二节　酶反应动力学的研究233

一、酶反应初速度的测定233

二、底物浓度对反应速度的影响——Km和νmax的测定233

三、最适温度、热稳定性和活化能的测定235

四、最适pH值的测定237

五、酶的激活与抑制237

第三节　酶、细胞和原生质体固定化技术238

一、吸附法固定化技术238

二、包埋法固定化技术239

三、结合法固定化技术240

四、交联固定化技术242

第四节　酶分子修饰技术242

一、金属离子置换修饰243

二、大分子结合修饰243

三、酶的侧链基团修饰245

四、肽链有限水解修饰248

五、核苷酸链剪切修饰249

六、氨基酸置换修饰249

七、核苷酸置换修饰250

第五节　实验251

实验12-1　β-半乳糖苷酶的诱导合成251

八、酶分子的物理修饰251

实验12-2　无机磷酸对枯草杆菌碱性磷酸酶生物合成的阻遏作用253

实验12-3　碱性磷酸酶的反应动力学性质254

实验12-4　L-谷氨酸脱羧酶的固定化256

实验12-5　枯草杆菌细胞固定化257

实验12-6　谷氨酸棒杆菌原生质体固定化258

实验12-7　固定化原生质体生产谷氨酸脱氢酶259

一、分离法261

第十三章　基因克隆技术261

第一节　基因的获取技术261

二、反转录法262

三、化学合成法264

四、聚合酶链反应（PCR）技术265

第二节　载体的制备技术267

一、载体的分类268

二、载体的制备269

一、黏性末端连接271

第三节　DNA体外重组技术271

二、平头末端连接272

三、修饰末端连接273

第四节　重组DNA引入受体细胞技术274

一、受体细胞的筛选与处理274

二、外源DNA引入受体细胞274

第五节　重组DNA的鉴定技术276

一、DNA印迹技术276

二、RNA印迹技术278

四、DNA序列测定技术279

三、蛋白质印迹技术279

第六节　实验283

实验13-1　大肠杆菌Col EⅠ质粒的分离283

实验13-2　重组DNA的细胞转化285

实验13-3　Sanger法测定基因的序列286

实验13-4　DNA印迹杂交287

实验13-5　PCR扩增目的基因289

实验13-6　碱裂解法提取质粒DNA290

第一节　动物细胞融合技术292

第十四章　细胞融合技术292

一、细胞的制备293

二、细胞融合293

三、融合子的筛选294

第二节　原生质体融合技术295

一、原生质体制备295

二、原生质体融合299

三、细胞壁的再生300

四、融合子的筛选300

第三节　细胞拆合技术301

一、细胞器的分离302

二、细胞器重组303

第四节　实验305

实验14-1　枯草杆菌原生质体的制备305

实验14-2　酵母原生质体的分离与再生305

实验14-3　从胡萝卜细胞分离原生质体307

实验14-4　动物细胞微核体和胞质体的制备308

附录310

主要参考文献321