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第一节 材料的选择与处理3

一 材料的选择3

第一章 生命大分子物质的制备3

二材料的处理4

第二节 确立测定方法5

一 目的与要求5

二 常用的测定方法5

第三节 细胞的破碎8

一 机械破碎9

二 溶胀和自溶9

一 抽提的含义10

二 抽提有效成分的影响因子10

三 化学处理10

第四节 抽提10

四 生物酶降解10

第五节 浓缩13

一 沉淀法14

二 吸附法14

三 超过滤法14

四 透析法14

一 纯化方案的设计15

第六节 纯化方案的设计与评价15

五 减压蒸馏法15

六 冰冻干燥法15

二 纯化方案的评价17

第七节 有效成分纯度和性质的分析18

第八节 应用实例18

思考题与参考文献19

一 基本原理23

二 制备蛋白质23

第一节 基本原理与沉淀类型23

第二章 沉淀法23

三 制备核酸33

第二节 应用实例36

一 脾磷酸二酯酶的纯化36

二 细菌染色化DNA的制备36

思考题与参考文献37

第三章 吸附层析39

第一节 吸附柱层析40

一 常用术语40

二 基本原理41

三 吸附剂42

四 洗脱剂45

五 层析柱的制备与层析操作45

六 应用与实例48

第二节 薄层层析51

一 操作及注意事项52

二 应用实例58

第三节 聚酰胺簿膜层析59

一 基本原理59

二 应用实例59

思考题与参考文献63

第四章 疏水层析64

第一节 基本原理64

第二节 操作与应用65

一 层析拄的制备65

二 加样与洗脱66

三 应用实例66

思考题与参考文献69

第五章 离子交换层析70

第一节 基本原理70

一 分类72

第二节 离子交换剂的分类及性质72

二 性质80

第三节 离子交换剂与缓冲液的选择88

一 离了交换剂的选择88

二 缓冲液的选择89

三 加样量的确定92

第四节 操作92

一 离子交换剂的处理、再生和转型92

二 分离物质的交换93

三 物质的洗脱与收集94

一 制备、纯化生命物质96

第五节 应用96

二 测定蛋白质的等电点99

思考题与参考文献100

第六章 凝胶过滤101

第一节 凝胶的分类及性质101

一 葡聚糖凝胶102

二 琼脂糖凝胶104

三 聚丙烯酰胺凝胶106

四 Sephacry1106

五 Superdex108

第二节 基本原理109

一 凝胶的选择和处理111

第三节 操作111

二 凝胶柱的制备112

三 加样与洗脱113

四 凝胶住的再生及保存117

第四节 应用118

一 脱盐和浓缩118

二 分离生命物质118

三 去热源物质120

四 测定分子质量120

思考题与参考文献123

五 其他123

第七章 亲和层析124

第一节 基本原理124

第二节 操作126

一 基质的选择126

二 配体的选择127

三 亲和吸附剂的制备129

四 特异性吸附131

五 分离大分子物质132

一 在配体和基质之间引入“手臂”134

六 亲和层析柱的再生134

第三节 提高吸附剂的操作容量134

二 增加配体取代的程序135

三 配体与基质以最小的链连接137

四 基质多孔性的影响137

五 其他137

第四节 应用实例138

一 纯化大分子物质138

二 研究酶的结构与功能141

三 实例142

思考题与参考文献145

第一节 基本原理146

一 多缓冲剂和多缓冲剂交换剂146

二 聚焦层析原理147

第二节 操作150

一 多缓冲剂的选择150

二 多缓冲交换剂用量的确定150

三 多缓冲交换剂的处理151

四 样品的准备152

五 上样和洗脱152

一 分离模型蛋白质153

六 样品中多缓冲剂的去除153

第三节 应用153

二 分离复杂的物质154

三 鉴定某些酶的性质154

思考题与参考文献156

第九章 高效液相色谱157

第一节 基本原理158

第二节 反相高效液相色谱161

一 固定相、流动相和色谱柱162

二 分离纯化糖基化白蛋白肽片段164

一 定性和定量分析166

第三节 应用166

二 测定酶活性167

三 测定蛋白质分子质量167

四 分离核酸和蛋白质168

思考题与参考文献174

第十章 固定化的酶与微生物175

第一节 制备方法176

一 固定化酶176

二 固定化微生物179

一 酶的相对活力180

第二节 制品的性质180

二 活力曲线与最适pH值181

三 稳定性182

四 米氏常数183

五 其他184

第三节 应用184

一 工业方面184

二 医学方面185

三 生化分析方面186

四 应用实例188

思考题与参考文献190

第十一章 标记193

第一节 核酸标记193

一 标记物的制备及类型193

二 非核素标记194

三 核素标记208

四 标记物纯化211

五 探针的鉴定213

六 应用实例216

一 标记方法220

第二节 蛋白质(酶、抗体)标记220

二 核素和非核素标记226

思考题与参考文献234

第十二章 重组DNA235

第一节 重组DNA的部件236

一 工具酶236

二 载体238

三 目的基因241

第二节 重组247

一 黏性末端连接法247

四 T-A连接法249

五 同聚物加尾连接法249

二 平端连接法249

三 平黏连接法249

六 人工接头连接法250

第三节 DNA扩增252

一 重组DNA导入宿主细胞252

二 重组体的筛选与鉴定254

三 表达产物的纯化256

三 RCR扩增及其产物纯化257

二 反转录合成第一链cDNA257

一 分离总RNA和mRNA257

第四节 应用实例257

四 PCR产物的克隆258

五 重组质粒的提取及限制性内切核酸酶分析258

思考题与参考文献260

第十三章 DNA序列测定260

第一节 双脱氧链终止法260

一 基本原理260

二 载体系统262

三 测序试剂265

四 测序操作268

五 变性电泳271

六 序列读取271

第二节 PCR法273

一 直接测序273

二 循环测序274

第三节 化学降解法275

一 测序原理276

二 一般程序277

三 具体操作277

四 应用实例280

思考题与参考文献281

第十四章 生物芯片282

第一节 基因芯片282

一 基本原理和工作流程282

二 制备及操作285

三 应用实例291

第二节 蛋白质芯片296

一 原理及特点297

二 制备与操作297

三 应用实例299

一 芯片实验室的特点303

第三节 芯片实验室303

二 应用实例304

思考题与参考文献307

第十五章 聚合酶链反应308

第一节 基本原理308

一 反应系统308

二 反应过程及条件313

第二节 PCR的类型315

一 普通PCR315

三 反转录PCR316

二 原位PCR316

四 反向PCR317

五 不对称PCR318

六 巢式PCR318

七 彩色PCR319

第三节 应用320

一 构建cDNA文库320

二 直接测序320

三 标记DNA探针320

四 寻找新基因320

思考题与参考文献321

五 检测环境中的致病菌与指示菌321

第十六章 细胞凋亡322

第一节 基本原理与主要特性322

一 基本原理322

二 主要特性334

第二节 检测细胞凋亡的方法337

一 形态学337

二 DNA片段339

三 酶活性与组蛋白340

四 流式细胞仪342

一 抗肿瘤药物的研究和开发344

二 疾病的诊断和治344

第三节 应用344

思考题与参考文献346

第十七章 生物传感器347

一 离子选择电极348

二 生物活性材料349

一 类型350

二 制备350

第二节 类型与制备350

第三节 应用351

一 工业方面351

二 医学方面352

三 环境监测方面353

思考题与参考文献353

第十八章 电泳355

第一节 基本原理356

第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳358

一 基本原理359

二 一般操作364

第三节 琼脂糖凝胶和半干式聚丙烯酰胺凝胶电泳383

一 琼脂糖凝胶电泳384

三 半干式聚丙烯酰胺凝胶电泳（分离DNA）387

第四节 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳388

一 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳389

二 尿素-聚丙类酰胺凝胶电泳390

三 SDS-尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳391

第五节 聚丙烯酰胺凝胶电聚焦392

一 基本原理393

二 载体两性电解质的理化性质393

三 载体两性电解质的pH范围与用量选择394

四 测定蛋白质等电点的操作395

第六节 毛细管电泳399

一 基本原理与类型399

二 电泳装置402

三 应用实例405

第七节 印迹法(转移电泳)407

一 基本原理408

二 操作及注意事项409

三 应用411

思考题与参考文献413

一 抗体的性质414

第十九章 免疫分析414

第一节 抗体的性质、制备及纯化414

二 多克隆抗体的制备415

三 单克隆抗体的制备421

四 抗体的检测425

五 抗体的纯化428

第二节 抗原抗体反应430

一 凝集反应430

二 免疫扩散434

三 免疫电泳436

五 免疫微球测定449

四 固相免疫吸附（含ELISA）449

思考题与参考文献454

第二十章 气相色谱456

第一节 基本原理457

一 常用术语457

二 原理458

第二节 气相色谱仪的构造460

一 载气流速的控制和测量460

四 色谱柱461

三 恒温室461

二 进样系统461

五 检定器465

第三节 操作466

一 操作要点466

二 条件的选择467

第四节 定性和定量检测467

一 定性检测467

二 定量检测468

二 分析核酸472

三 分析糖类物质472

一 分析蛋白质和氨基酸472

第五节 应用472

四 分析脂肪酸473

五 分析农药474

思考题与参考文献474

参考文献475

附录484

一、 常用数据484

二、 常用缓冲液的配制494

缩写词索引499